小鼠白介素35(IL-35)ELISA試劑盒操作步驟

    小鼠IL-35ELISA試劑盒的通用標準操作步驟（基于主流商品化試劑盒整理，適配多數品牌）如下，實際操作請結合對應試劑盒說明書調整：

    一、實驗前準備

    試劑盒從2-8℃冷藏環(huán)境取出，室溫平衡至少20分鐘，讓所有試劑溫度恢復至室溫；實驗所需蒸餾水/去離子水、酶標儀提前備好。

    稀釋濃縮洗滌液：按說明書比例稀釋（20倍濃縮液按1:19加蒸餾水，30倍濃縮液按1:29加蒸餾水），混勻備用。

    標準品復溶：凍干標準品加入對應體積的標準品稀釋液，蓋好后室溫靜置10分鐘，反復顛倒搓動助溶，再按說明書進行倍比稀釋，制備梯度濃度標準品。

    二、加樣與孵育

    取出酶標包被板，設置?空白孔、標準品孔、待測樣本孔?，空白孔不加樣品和酶標試劑，其余步驟操作相同。

    標準品孔：每孔加入對應濃度的標準品50μL。

    待測樣本孔：先加入樣品稀釋液40μL，再加入待測樣本10μL（最終稀釋度為5倍），加樣時將樣品加于孔底，避免觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    用封板膜封板，置于37℃恒溫箱/水浴鍋溫育60分鐘。

    三、洗滌

    揭掉封板膜，棄去孔內液體并甩干。

    每孔加滿稀釋后的洗滌液，靜置1分鐘后棄去，重復此操作洗滌5次，最后在吸水紙上充分拍干孔內殘留液體。

    四、加酶與顯色

    除空白孔外，每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，重新封板后37℃溫育60分鐘（部分簡化試劑盒此處為30分鐘，以說明書為準）。

    重復洗滌步驟5次，充分拍干。

    每孔先加入顯色劑A50μL，再加入顯色劑B50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。

    五、終止與讀數

    孵育完成后，每孔加入終止液50μL，終止反應。

    加入終止液后15分鐘內，用酶標儀在450nm波長下測定每孔的吸光度（OD值）。

    六、結果計算

    以標準品濃度為橫坐標，對應OD值為縱坐標繪制標準曲線，根據樣本OD值從標準曲線查出對應的濃度，再乘以樣本的稀釋倍數，得到最終樣本中IL-35的實際濃度。

    注：以上科研產品資料供參考!

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