如何正確使用40ul全裙邊384孔PCR板

    40μL全裙邊384孔PCR板?的正確使用需嚴格遵循選型、加樣、密封、上機與后處理全流程規范，以確保實驗結果的準確性與可重復性。

    一、使用前準備

    耗材檢查?：確認板體無裂紋、變形或污染，選擇無DNase/RNase/PCR抑制劑的無菌板，開封后盡快使用。

    環境控制?：在超凈臺內操作，紫外消毒30分鐘；全程佩戴無粉手套和口罩，避免指紋或氣溶膠污染。

    試劑準備?：MasterMix冰上解凍、輕柔混勻并短暫離心（1000×g,1min），建議多配10%以防移液損耗。

    布板設計?：繪制384孔布板圖，標注樣本、引物/探針、內參、陰性/陽性對照及技術重復（≥3次）；邊緣孔優先設置對照以抵消邊緣效應。

    工具校準?：多通道移液器（8/16通道）校準至2–40μL量程，使用適配384孔的低吸附吸頭。

    二、加樣操作（穩、準、輕、無氣泡）

    方向定位?：雙切角朝向左上方（A1孔側），確保與儀器模塊和移液頭方向一致。

    加樣順序?：

    先加MasterMix：吸頭距孔底1–2mm，緩慢推出（2–3s），每通道更換吸頭；

    后加模板/引物：輕柔吹吸2–3次混勻，禁止劇烈震蕩；同一樣本組連續加樣以減少交叉污染。

    體積控制?：單孔推薦體積2–25μL，最大不超過30μL，防止熱封時溢出。

    除氣泡?：加樣后立即短離心（2000–3000×g,2–5min），使用384孔適配器排盡氣泡。

    三、密封處理（防蒸發+保熒光）

    封膜選擇?：使用光學透明粘性封板膜（qPCR專用，高透光、低熒光）。

    貼膜操作?：

    膜從一端對齊板邊，緩慢平整貼合，避免褶皺、氣泡或漏封；

    用壓板器或卡水平+垂直各壓2次，重點壓實四角與邊緣。

    強化密封?：

    可選熱封儀（105–110℃,2–3s）；

    或冷封后離心（500×g,1min）驗證密封性。

    禁忌?：禁用普通封口膜或保鮮膜，因其透光差、易揮發且干擾熒光信號。

    四、上機與擴增設置

    上機操作?：將板平穩放入384孔加熱模塊，雙切角與儀器定位槽對齊，確保貼合；關閉熱蓋，壓力適中以防壓碎。

    參數設置示例（qPCR）?：

    預變性：95℃,2min（1cycle）；

    擴增循環：95℃,5s；60℃,15–30s（熒光采集）；40–45cycles；

    熔解曲線（可選）：60–95℃梯度升溫采集；

    啟用ROX參比染料校正孔間信號差異。

    運行注意?：避免中途開蓋；運行結束后待模塊降溫至≤40℃再取板。

    五、實驗后處理

    短期保存?：4℃避光，≤24小時；

    長期保存?：-20℃（避免反復凍融）；

    廢棄處理?：高壓滅菌（121℃,20min）后按生物垃圾處理；不可重復使用。

    六、常見問題與規避

    注：以上供參考！

    本生產品涵蓋有熒光定量PCR耗材（八聯管，單管，96孔板，384孔板，封板膜，輔助器等），ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養皿，培養板，培養瓶，吸頭，儀器及手套，培養基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過濾器及實驗室常用耗材。品種類超過萬種，廣泛應用于科研院校、中心實驗室、分子生物學等科研域。